Форум

ИСКУССТВЕННОЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЕ СОБАК
Новая технология, созданная в Украине

Егоров Максим Игоревич
Егоров Максим Игоревич - кинолог со стажем в 14 лет. Работать с собаками начал незадолго до армии с 1990 года.
С 1991 года служил во Внутренних Войсках СССР инструктором по служебному собаководству. После окончания службы в армии сдал экзамен на инструктора по собаководству в Харьковском региональном кинологическом центре служебного собаководства.
Закончил Харьковский зооветеринарный институт (сейчас - Харьковская зооветеринарная академия). С 2001 года занимается исследованиями в области криоконсервирования сперматозоидов собак, которые были начаты с целью сохранения породы ЮРО.
После зачисления в аспирантуру института криобиологии и утверждении темы по исследованию механизмов повреждения спермиев собак при криоконсервировании получил поддержку от группы сотрудников, пытавшихся еще 12 лет назад начать такие же исследования. В результате образовалась рабочая группа из 4-х человек, которая сейчас и занимается всем спектром вопросов, связанных с этой темой.
В группу входят: Линник Тамара Павловна (доктор биол. наук), Новиков Александр Николаевич (кандидат биол. наук),
Дюбко Татьяна Станиславовна (кандидат биол. наук).
Руководством института поддерживается идея создания банка спермы ЮРО на базе существующего (в институте) криобанка.
Приглашаются к сотрудничеству все заинтересованные лица - кинологи, заводчики, владельцы питомников и просто владельцы собак.
e-mail: cryomax@mail.ru
На первых этапах разработки методов криоконсервирования сперматозоидов собак был взят за основу метод, используемый для криоконсервации сперматозоидов быков. Впервые щенки после оплодотворения криоконсервированной спермой были получены в 1969 году Зигером, который адаптировал предложенный Нагаси и Нивой метод криоконсервации бычьих сперматозоидов. В 1973 году этот метод, но только с использованием в качестве хладогента жидкого азота, был опробован вторично и после хранения криоконсервированных СС в течение 1 года был получен 21 здоровый щенок. В дальнейшем были выявлены значительные отличия в криоустойчивости сперматозоидов собак и быков, проводились работы по подбору оптимальных сред для разбавления клеток перед криоконсервацией, режимов охлаждения и множества других составляющих технологии. Однако, несмотря на то, что во многих крупных ветеринарных центрах развитых стран уже созданы криобанки сперматозоидов собак, до сих пор существует целый ряд нерешенных вопросов в отношении технологии замораживания и последующего использования оттаянных клеток. Сохранность клеток после отогрева остается невысокой - по данным разных авторов она не превышает 25 - 40 % живых, способных к оплодотворению клеток, в сравнении с таковыми до замораживания. Количество щенков, рождающихся после оплодотворения самок криоконсервированной спермой в одном помете (многоплодие) уступает числу щенков при использовании обычной вязки. Определение сроков осеменения самок криоконсевированной спермой (точное время созревание яйцеклеток и готовность их к оплодотворению) требует проведение гормональных тестов на концентрацию прогестерона и других гормонов плазмы крови эстральной (течной) суки. Проведение таких тестов обусловлено необходимостью синхронизировать время созревания яйцеклетки и поступление замороженно-оттаянных сперматозоидов в матку ввиду ограниченного времени функционирования спермиев после отогрева.

Поиск технических решений, которые позволили бы увеличить процент выживших после оттаивания сперматозоидов собак ведется и в Украине. В Харькове, на базе Института проблем криобиологии и криомедицины начиная с 2001 года были предприняты попытки вначале воспроизвести уже известные методы, а когда они оказались не достаточно эффективными, разработать свой метод. Коротко остановлюсь на уже сделанном. Одной из проблем, возникающей при криоконсервировании сперматозоидов собак, является несовершенство криозащитных сред. Две составляющие, а именно желток куриных яиц и непосредственно криопротектор (т. е. вещество, предохраняющее клетки от повреждения при замораживании), входят во все известные криозащитные среды, применяемые на спермиях собак. Концентрация различных веществ в составе желтка куриных яиц значительно варьирует в зависимости от состояния кур-несушек, поэтому говорить о каком-либо стандартном составе криозащитной среды не приходится. Кроме того, желток, как прекрасная среда для инкубирования разного рода бактерий, может быть переносчиком инфекций при искусственном осеменении самок, если клетки после оттаивания не отделять от него. Отмывка клеток после оттаивания (отделение от компонентов криозащитной среды) влечет за собой дополнительные повреждения сперматозоидов. Предпринимались попытки замены желтка обезжиренным молоком, но, по всей видимости это не принесло желаемых результатов. Еще один путь замены желтка, исследованный в большей степени на спермиях других видов млекопитающих и не получивший продолжения на собаках, заинтересовал нас больше. Использование в криозащитных средах низкомолекулярных белков в технологиях замораживания половых клеток других видов животных имело часто положительный эффект, но на спермиях собак этот эффект показан не был. Нам удалось подобрать такой состав и концентрацию белков, который давал возможность сохранять подвижными после оттаивания количество клеток, превышающее процент сохранности их в присутствии желтка. При этом, время, в течение которого клетки оставались подвижными после оттаивания удалось увеличить как за счет применения белков, так и за счет использования криопротектора, более эффективного и менее токсичного, чем применяемый на спермиях собак глицерин.

Таким образом, использование нашей технологии дает возможность сохранять высокий процент подвижных клеток (около половины от всей подвижной фракции), что достаточно для осеменения.

В данный момент наши усилия направлены на проведение пробных осеменений с целью проверить эффективность созданной технологии. Для этого совместно с Харьковской государственной зооветеринарной академией весной этого года намечается серия экспериментов по оплодотворению самок замороженно-оттаянной спермой. Мы с надеждой ждем результатов. В планах - разработка переносного замораживателя для спермы собак с целью использования его в полевых условиях.

В завершение хотелось бы сказать о том, что итогом всей работы могло бы стать создание генофонда такой прекрасной породы собак как южнорусская овчарка, на базе существующего в нашем институте криобанка. Для кинологов не новость, что эта порода находится на грани исчезновения. Сохранение ее благодаря единичным существующим сегодня питомникам, маловероятно. К сожалению, наши научные разработки могут так и остаться,как говориться, «на полке». На сегодня бюджет государственного института не позволяет провести экспедицию по накоплению спермодоз «южака» в регионах, где эта порода еще сохранилась. Остается надеяться только на энтузиастов породы и возможную помощь от клубов собаководства. В тоже время, национальный статус криобанка нашего института и известность его за рубежом, может быть гарантом того, что на долгие годы удастся сохранить криоконсервированные половые клетки южнорусской овчарки и воспроизвести эту породу в случае ее окончательного исчезновения.